Summary: 研究室が新しい細胞株を入手した後、細胞株は最初に培養および増殖され、次に凍結されなければなりません。細胞の凍結保存は、汚染やその他の条件によって細胞が失われた場合のバックアップとして最初に使用できます。さらに、ほとんどすべての細胞は、培養および継代の過程である程度の変動を受けます。実験結果の一貫性を維持するために、一般的に細胞は数十世代にわたって培養することはできません。再度使用する場合は、凍結保存した継代の少ない細胞を解凍して培養する必要があります。 ......
研究室が新しい細胞株を入手した後、細胞株は最初に培養および増殖され、次に凍結されなければなりません。細胞の凍結保存は、汚染やその他の条件によって細胞が失われた場合のバックアップとして最初に使用できます。さらに、ほとんどすべての細胞は、培養および継代の過程である程度の変動を受けます。実験結果の一貫性を維持するために、一般的に細胞は数十世代にわたって培養することはできません。再度使用する場合は、凍結保存した継代の少ない細胞を解凍して培養する必要があります。
細胞凍結プロセスには、細胞採取、保護剤の使用、凍結速度、保管環境の4つの主要なポイントがあります。
細胞採取
凍結保存に使用される細胞は、一般に、細胞が約90％コンフルエントである場合に選択されます。このとき、細胞増殖は良好で細胞数も多いため、採取の24時間前に培地を交換する必要があります。凍結保存のために細胞を採取する方法は通常と同じです。 100xgで5分間遠心分離して細胞を回収し、再懸濁します。生細胞がカウントされます。細胞保存のために最終細胞濃度の2倍（通常400万から1000万細胞/ ml）に希釈または濃縮し、調製した培地保護剤混合液を等量加え、穏やかに混合し、凍結保存チューブに分注します。凍結保存。
保護剤の使用。
細胞の凍結保存では、DMSOは一般的に保護剤として使用されます。細胞凍結保存では、使用されるDMSOの最終濃度は一般的に5〜15％です。特定の細胞の凍結保存溶液中のDMSOの濃度は、ATCCから見つけることができます。特に感受性の高い細胞、特にハイブリドーマ細胞の場合、凍結保存する際には95％の血清と5％のDMSOを使用する方がよい場合があります。保護剤を使用する場合は、培地または血清を使用して最終濃度を2倍にし、等量の浮遊細胞培養液と混合します。 細胞凍結率
細胞の凍結速度は、過度の脱水によって損傷を受けることなく細胞が脱水されるのに十分な時間を与えるように最適に制御されます。ほとんどのセルでは、1分あたり1〜3°Cの温度低下が適切です。通常の操作では、セルを-20°Cで1〜2時間置いてから、-80°Cの冷蔵庫に一晩入れます（-80°Cの冷蔵庫がない場合は、代わりにドライアイスを使用できます）。その後、液体窒素タンクまたは-130以下に移します。℃で冷蔵庫に長期保管します。
ストレージ環境
セルの長期保管温度は-130℃以下です。液体窒素タンク内の気体層の温度は-140℃から-180℃の間です。細胞は気体層に保存することも、液体窒素に浸すこともできます。可能であれば、液体窒素が凍結貯蔵庫に入るのを防ぐことができるため、気体層に貯蔵するのが最善です。セルを取り出すとチューブが爆発します（ただし、この方法では、液体窒素タンクに少量の液体窒素しか貯蔵できないため、頻繁に追加する必要があります）。 -80℃の冷蔵庫で数ヶ月程度保存することもできます。
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